本文標題:"細胞培植觀(guān)察用顯微鏡出售!實(shí)驗室專(zhuān)用"
發(fā)布者:yiyi ------ 分類(lèi): 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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單株抗體的制作
要在生物體外大量制作單株抗體,就必須先將專(zhuān)門(mén)分泌抗體的B細胞移殖到培養皿上,不幸的是,大部分的B細胞一離開(kāi)生物體就會(huì )死亡,無(wú)法在生物體外繁殖,連B細胞都養不活了,那能指望B細胞分泌抗體呢?后來(lái)科學(xué)家發(fā)現,世界上只有一種細胞生命力強盛,不管移殖到那里都能活的好好的,那就是「癌細胞」,癌細胞是不正常且快速生長(cháng)的細胞,可以在培養基(一種含有養份的液體)中大量繁殖,如果將B細胞可以分泌抗體的特性與癌細胞生命力強盛的特性結合起來(lái),就可以在培養皿上大量制作單株抗體了。
單株抗體的制作方法是先將B細胞與骨髓癌細胞融合成一個(gè)細胞,稱(chēng)為「融合瘤」,如**圖16-7(a)所示,在融合的過(guò)程中B細胞與癌細胞的基因會(huì )重組,所以融合瘤含有B細胞與癌細胞基因重組后的染色體,同時(shí)具有B細胞與癌細胞的特性,可以分泌抗體,又可以在培養皿中大量繁殖。融合瘤的制作流程如下:
>PEG細胞融合
將抗原(病毒)注入小白鼠體內,再取出脾臟(含有大量的B細胞),并且將脾臟細胞與癌細胞混合,加入PEG試劑進(jìn)行細胞融合,PEG試劑是一種化學(xué)藥品,會(huì )將B細胞與癌細胞的細胞膜分解,讓B細胞與癌細胞結合成一個(gè)融合瘤。
>HAT篩選(Hypoxanthine、Aminopterine、Thymidine)
將融合瘤以HAT培養基(一種含有化學(xué)藥品的液體)來(lái)培養,由于B細胞不容易在生物體外生長(cháng),因此會(huì )自然死亡;癌細胞雖然很容易在生物體外生長(cháng),但是會(huì )被HAT培養基殺死;最后只有B細胞與癌細胞結合形成的融合瘤存活下來(lái),如圖16-7(b)與(c)所示。
>ELISA篩選(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
并非所有的B細胞都會(huì )產(chǎn)生我們所要的抗體,小白鼠原先就存在許多B細胞分泌抗體對抗其他疾病,因此必須使用酵素免疫分析法(ELISA)篩選出我們所要的抗體。
>融合瘤單株化
接著(zhù)將融合瘤,先稀釋分配到96個(gè)培養皿中,再以酵素免疫分析法(ELISA)篩選而得到「單株的融合瘤」。
>產(chǎn)生抗體
將單株的融合瘤注入小白鼠腹部,再取出腹水,腹水內就會(huì )含有大量的「單株抗體」。
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