本文標題:"宿主細胞培養物或生物研究圖像顯微鏡"
發(fā)布者:yiyi ------ 分類(lèi): 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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宿主細胞培養物或生物研究圖像顯微鏡
蛋白質(zhì)純化的特定要求變化很大,工業(yè)上用的許多酶其實(shí)并不很純
,但是,只要它們能夠勝任工作,也就足夠了。“加工”用酶(如
口一淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶)被成噸地生產(chǎn),主要以細菌培養物
分泌產(chǎn)物的形式來(lái)生產(chǎn)。為了盡可能地降低成本,這些酶只經(jīng)過(guò)了
有限的純化工藝。而在另一種極端情況下,用于研究和分析的酶產(chǎn)
品則需要進(jìn)行高度的純化,以保證污染物的活性不會(huì )干擾酶的目的
用途,任何熟悉分子生物學(xué)用酶的人都知道,微量的DNA酶或RNA酶
污染可能會(huì )造成精心設計的實(shí)驗全盤(pán)皆輸。
蛋白質(zhì)純化所用的大多數方法都是在那個(gè)時(shí)期建立的,至少其原
理是在那時(shí)建立的。較近代的進(jìn)展主要是儀器裝備方面,用來(lái)優(yōu)化
每種方法學(xué)的應用。分子生物學(xué)的快速發(fā)展刺激了儀器裝備的進(jìn)展
,因為基因產(chǎn)物的分離通常要早于基因的分離。一方面由于使用微
量的蛋白質(zhì)就足以對這些產(chǎn)物進(jìn)行定性分析(如部分測序),所以對
大規模甚至中等規模蛋白質(zhì)生產(chǎn)方法的需求下降,這樣,設計專(zhuān)門(mén)
用于處理毫克至微克范圍蛋白質(zhì)量的現代設備得到了極速的發(fā)展;
而另一方面,使用X射線(xiàn)晶體學(xué)和核磁共振(NMR)的結構研究需要幾
百克的純蛋白質(zhì),因此在實(shí)驗室研究中仍然需要大規模的設備和方
法。
所研究的蛋白質(zhì)性質(zhì)也發(fā)生了很大的變化,盡管酶曾經(jīng)是最熱
的研究對象,但現在已被一些非酶類(lèi)的蛋白質(zhì)(如生長(cháng)因子、激素
受體、病毒抗原和膜轉運蛋白)所超越。在這些蛋白質(zhì)中,有許多
在天然材料中的含量極微,其純化會(huì )成為一項主要的工作。在過(guò)去
曾進(jìn)行了巨大的努力,使用了千克量的起始原料(如人體器官),而
最后只得到了幾微克的純產(chǎn)物。而現在更通常的做法是使用遺傳學(xué)
的方法:在蛋白質(zhì)被純化之前甚至在被正確鑒定之前克隆基因,然
后在適當的宿主細胞培養物或生物中表達,表達水平會(huì )比原始材料
高幾個(gè)數量級,這樣會(huì )使得純化工作相對簡(jiǎn)單。預先知道一些蛋白
質(zhì)的物理特性會(huì )很有用,有助于建立適當的純化方案,從重組材料
中純化蛋白質(zhì)。從另一方面講,現在制備融合蛋白的方法很多,可
通過(guò)親和技術(shù)進(jìn)行純化,而不必知道目的蛋白的任何性質(zhì),而且也
有方法對表達產(chǎn)物進(jìn)行修飾,以進(jìn)一步簡(jiǎn)化純化步驟。
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