本文標題："激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來(lái)激發(fā)"
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激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來(lái)激發(fā)
快掃描共聚焦顯微鏡可控程度不如線(xiàn)頂式(top of the line)
慢掃描顯微鏡掃描模式，有些以攝像速度成像的共聚焦顯微鏡不能
選用多波長(cháng)照明。以攝像速度成像的顯微鏡要選用裂隙孔徑而不是
針孔孔徑，而前者的橫向及縱向分辨率較差。
有一種快速掃描共聚焦顯微鏡，因為它價(jià)格低廉(還有其他原
因)值得一提，它用有多個(gè)針孔(約200 000個(gè))的自旋盤(pán)同時(shí)照明來(lái)
檢測標本內多點(diǎn)的發(fā)射光。光源可以用激光器或那種用于傳統表面
熒光顯微鏡的寬光譜燈。這種共聚焦顯微鏡的主要優(yōu)點(diǎn)在于它能較
快的采集圖像高達700幀／s，解線(xiàn)率(1ines resolution)為5000線(xiàn)
]。它的圖像可以直接用眼觀(guān)察，也可以用靈敏的相機照下來(lái)。它
的主要缺點(diǎn)在于自旋盤(pán)只能通過(guò)獲得光線(xiàn)的1％左右，原因在于自
旋盤(pán)內的孔需要較大的間隔。最近有一種新型自旋盤(pán)共聚焦顯微鏡
問(wèn)世了，它用顯微透鏡來(lái)提高透光率，共聚焦成像速度高且靈敏度
也較高。
另一種很有價(jià)值的激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)激
發(fā)來(lái)誘導熒光產(chǎn)熒光團吸收兩個(gè)光子時(shí)產(chǎn)生雙光子激發(fā)，每個(gè)光子
各自擁有促使熒光團進(jìn)入激發(fā)態(tài)的能量的一半。只有在焦點(diǎn)位置的
光強度才能滿(mǎn)足同時(shí)吸收雙光子的需求，所以只有焦平面上的熒光
團才能被激發(fā)。因此，在檢測儀前不安裝空問(wèn)濾光片的情況下，雙
光子激發(fā)仍可以進(jìn)行光切。此外，由于焦點(diǎn)外的熒光團不被激發(fā)，
所以與傳統的激光掃描顯微鏡相比，它的標本不容易發(fā)生光漂白。
與單光子激發(fā)相比，雙光子吸收用以激發(fā)可見(jiàn)光熒光團所需的波長(cháng)
更長(cháng)、組織穿透力更好，因此能檢測標本更深處的結構。另外，傳
統激光掃描顯微鏡選用紫外波長(cháng)時(shí)，紫外熒光團成像會(huì )出現較多問(wèn)
題，但如果使用雙光子激光掃描顯微鏡，則許多問(wèn)題都不會(huì )發(fā)生。
目前雙光子共聚焦顯微鏡的一個(gè)缺點(diǎn)是合適的激光器的價(jià)格太高。
現在市場(chǎng)上已有雙光子掃描顯微鏡(Bio—Rad，Leica)。應用指南
成像參數的優(yōu)化物鏡選擇
由于大數值孔徑的物鏡比小數值孔徑的物鏡采光多(亮度相當
于NA4)，所以通常熒光顯微鏡最好選用大數值孔徑的物鏡。大多數
高質(zhì)量大數值孔徑的物鏡的可見(jiàn)光波長(cháng)頁(yè)
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激光掃描顯微鏡采用了雙光子(和三光子)來(lái)激發(fā),金相顯微鏡現貨供應
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