本文標題:"流式細胞儀是以顯微鏡技術(shù)為基礎的儀器"
發(fā)布者:yiyi ------ 分類(lèi): 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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流式細胞技術(shù)簡(jiǎn)介
流式細胞儀是以顯微鏡技術(shù)、血球計數儀、噴墨技術(shù)為三大基礎發(fā)展出的儀器,主要由液流系統、光學(xué)系統、 電子系統所組成。原理為利用鞘液(Sheath Fluid)流通過(guò)程中,加壓使樣品分析管中的細胞懸浮液循采樣管經(jīng)管路進(jìn)入液流腔(Flow Chamber),由于管徑縮減,形成流體動(dòng)力聚焦(Hydrodynamic Focusing),讓細胞或懸浮粒成為單顆排列,依序通過(guò)打在分析槽(Flow Cell)上的雷射。由于細胞的大小及內容物會(huì )對雷射光造成散射,并且,雷射能夠激發(fā)標定于細胞上的螢光物質(zhì),因此能藉由收集前散射光(FS)、側散射光(SS)、螢光(FL)的光學(xué)訊號,轉換為電子訊號,加以分析而得知樣品中的細胞類(lèi)型及特性
流式分析圖表以柱型圖(Histogram)及點(diǎn)圖(Dot Plot)為主。使用柱型圖時(shí)需先指定 X 軸顯示項目,例如螢光強度(FL intensity),Y 軸則顯示相對應于不同訊號強度的顆粒數(events);使用點(diǎn)圖則 X、Y 軸均需指定,例如 X 軸顯示前散射光強度(FS integral)、Y 軸顯示側散射光強度(SS log)。不論是柱型圖或點(diǎn)圖,均可界定或圈選細胞群,針對特定細胞群做進(jìn)一步分析。完成分析后,可圈選出欲分選的目標細胞群。
除了分析之外,流式細胞分析分選儀的另一個(gè)主要功能即細胞分選(Sorting),能夠進(jìn)行細胞分選的液流腔必須結合有壓電或電磁轉換器(Piezoelectric Transducer or Electromagnetic Transducer),并須在分析時(shí)加上電極板。由于分選時(shí)仍需以雷射光偵測通過(guò)的細胞訊號,便可知道目前通過(guò)的細胞是否落于欲分選的目標群,同時(shí),利用壓電轉換器帶動(dòng)液流腔,藉振波原理使流通的水柱形成水珠,當將振動(dòng)頻率、振幅調整至適當大小時(shí),即可利用水珠攜帶如細胞之類(lèi)的顆粒物質(zhì)。若通過(guò)的細胞落于欲分選的目標群范圍,壓電轉換器即瞬間通電而使水帶電,因此水珠自水柱斷裂時(shí)帶有電荷,帶電荷的水珠由下方兩側分別帶正負電的電極板(Deflection Plates)引導,落入兩側的樣品收集管中。利用讓水珠帶正電或負電,可決定其所攜帶的細胞要落入哪一側的樣品收集管,不帶電的水珠(非目標細胞)則落入中央的收集管或廢液區。收集的細胞可供后續培養或實(shí)驗使用。
流式細胞分析技術(shù)可應用于細胞週期分析、基因組大小評估、核型分析(Karyotyping)和染色體分選、精細胞分析分選、微生物分析分選、鈣離子及膜電位分析、胞器分選、血液及骨髓細胞和淋巴細胞分析分選、癌癥研究、臨床檢驗等方面。
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