本文標題："食品樣品細胞特征比表型特征分析顯微鏡"
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食品樣品細胞特征比表型特征分析顯微鏡
遺傳檢測
前已述及的快速微生物檢測和鑒定方法是基于微生物遺傳特性
所產(chǎn)生的表型。這些表型受生長(cháng)條件(如溫度、pH、營(yíng)養、氧化還
原電位、環(huán)境和化學(xué)壓力、有毒物質(zhì)以及水分活度等)的影響?；?/div>
于表型的分析方法(甚至包括免疫學(xué)檢測)都依賴(lài)于微生物細胞產(chǎn)生
能被抗體識別的抗原或能被抗原識別的抗體。診斷微生物學(xué)中傳統
的“金標法”依靠表型的表達或變異所產(chǎn)生的特征來(lái)檢測。
細胞的遺傳特征比表型特征穩定得多。細菌的自發(fā)突變頻率約
為一億分之一。因此近年來(lái)遺傳檢測技術(shù)有所發(fā)展，成為診斷微生
物學(xué)中的確證環(huán)節。關(guān)于這方面的爭論還在繼續，監管微生物檢測
的政府部門(mén)和法規制定機構之間還沒(méi)有作出統一的決策。本節主要
討論基于遺傳檢測技術(shù)的診斷和鑒定系統。
遺傳檢測的第一個(gè)階段是采用已知的DNA探針與未知細菌的DNA
序列進(jìn)行雜交。Genetrak系統(Fμmingham, MA)提供了一種靈敏便
捷的方法來(lái)檢測食品中諸如沙門(mén)菌、李斯特菌、彎曲桿菌和大腸桿
菌0157等病原菌。最初，該系統采用標記在DNA探針上的放射性同
位素來(lái)檢測未知培養物中的互補DNA。此類(lèi)第一代探針的缺點(diǎn)有:①
大多數食品實(shí)驗室不希望在常規分析中使用放射性物質(zhì);②一個(gè)細
胞內的DNA拷貝數有限。第二代探針利用酶反應來(lái)檢測病原菌，并
以RNA作為靶分子。一個(gè)細胞內僅有一個(gè)完整的DNA拷貝，然而核糖
體RNA的拷貝數可能有1000一10000個(gè)。因此，新一代的探針采用顏
色反應來(lái)檢測目標RNA。對食品樣品中的細菌(如沙門(mén)菌)進(jìn)行約18h
的富集后，用去污劑將細胞(目標細胞以及其他微生物)溶解以便胞
內物質(zhì)(DNA, RNA及其他分子)釋放到溶液中。
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