本文標題："熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長(cháng)技術(shù)"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類(lèi): 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長(cháng)技術(shù)
如果最早一次的成像可行，那么在以后所有的GFP時(shí)延性實(shí)驗中
，采用已經(jīng)摸索出的設備參數，如掃描時(shí)間，激發(fā)水平和檢波器的
捕獲和篩檢，保持成像的一致性，或至少可以作為一個(gè)良好的起點(diǎn)
。8．設置圖像理想的像素大小。許多設備有可選擇的范圍(64像素
×64像素～2048像素×2048像素)。通常，每平方微米的像素越多
，影像就越清晰；然而，這些高像素的影像在同樣的像素設置時(shí)間
中需要更長(cháng)時(shí)問(wèn)的掃描，并且需要更多的儲存空間。記住為了使數
碼影像保持空問(wèn)分辨率，應該調整像素的大小到每個(gè)可分解單元≥
2個(gè)像素?？煞纸鈫卧?r)取決于物鏡的光圈(NA)和激發(fā)光的波長(cháng)Q)
(r—o．61xz／NA)。9．為每個(gè)影像設置理想的掃描時(shí)間。像前面
提到的，研究進(jìn)程的相對速度在一定程度上決定掃描時(shí)間。通過(guò)改
變像素設置時(shí)間(每個(gè)像素收集熒光的時(shí)間)改變總的掃描時(shí)間或者
平均一個(gè)像素所需要的時(shí)間(多次影像掃描后，單個(gè)像素收集的總
熒光除以?huà)呙璐螖?。簡(jiǎn)單地說(shuō)，改變掃描時(shí)間在本例中不會(huì )引起
差別。然而，如果使用平均像素，則應考慮到與畫(huà)面平均(重復掃
描整張影像)相對的線(xiàn)平均(用平均的像素重復掃描單一的像素線(xiàn)，
進(jìn)行平均)與平均畫(huà)面。在活細胞中，熒光標記的蛋白質(zhì)可能正在
細胞中運動(dòng)，而且平均畫(huà)面像素經(jīng)過(guò)掃描一整張影像所需要的時(shí)間
在不同的時(shí)間點(diǎn)被收集。這樣將會(huì )使熒光信號在比平常更大的范圍
內丟失。
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